Metodología de micro dispositivo de análisis en papel para la detección y cuantificación de protrombina en sangre

Abstract

Los métodos actuales para el diagnóstico de analitos en matrices complejas representan un alto grado de inversión económica y principalmente de tiempo. Existen técnicas que proporcionan información de alta confiabilidad que engloban una amplia gama de conocimientos con aplicación en muchas áreas, la microfluídica es una de ellas. El objetivo de esta técnica es desarrollar sistemas en los que se utilizan volúmenes pequeños. La caracterización de los micro dispositivos de análisis en papel son parte de un proyecto global que pretende el desarrollo de nuevas tecnologías de detección con fluorescencia de blancos biológicos usando aptámeros donde la microfluídica es una alternativa. El desarrollo de esta investigación fue divida en tres fases importantes. En la fase preliminar se usó el kit de Micro BCA Protein Assay Reagent obteniendo una reacción colorimétrica morada, mientras que en la primera fase de desarrollo se empleó el kit Liquicolor Glucose obteniendo una reacción colorimétrica naranja. Finalmente, en la segunda y última etapa un complejo de aptámero unido al pigmento, NMM IX, fue usado. La fluorescencia fue observada cuando el complejo fue exitado usando un transiluminador de luz azul con el dispositivo de microfluídica cargado con una muestra de plasma (con la ayuda de detección de protrombina, molécula diana de esta fase). En la segunda fase se aplicaron una serie de ensayos para el análisis de fluorescencia, métodos de lavado y concentraciones óptimas fueron testeados. Los resultados de estos ensayos fueron positivos. Cada una de las fases muestran resultados que en el futuro podrían ser replicados para cualquier tipo de analito con micro dispositivos de análisis en papel. En general cada kit empleado funciona con los micro dispositivos de análisis de papel. Para lograr la cuantificación de protrombina es necesario cambiar el diseño del chip para que el pigmento NMM IX, no se pegue a la fibra de celulosa y lograr como resultado una fluorescencia óptima.