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Título : Estandarización de un protocolo de recolección de muestras y PCR en tiempo real para la detección e identificación de especies de leptospira patógenas en muestras de agua de río.
Autor : Barragán, Verónica (dir)
Gutiérrez Granja, Bernardo Miguel
Descriptores / Subjects : Biotecnología
Ciencias
Fecha de Publicación : 2013
Ciudad: Editorial : Quito, 2013.
Cita Sugerida : Tesis (Licenciado en Biotecnológia), Universidad San Francisco de Quito, Colegio de Ciencias Biológicas y Ambientales; Quito, Ecuador, 2013.
Resumen / Abstract: La leptospirosis es una enfermedad zoonótica de distribución mundial, y un problema de salud considerable en el Ecuador. Esta enfermedad, causada por bacterias del género Leptospira, se transmite comúnmente a través de fuentes de agua y suelos contaminados con orina de mamíferos infectados. Por esta razón, el monitoreo de fuentes de agua de uso común en zonas de riesgo es una herramienta importante para comprender la aparición de brotes de esta enfermedad. El presente estudio utilizó una estrategia de PCR convencional y PCR en tiempo real (Real Time PCR) para determinar la presencia de especies patógenas de Leptospira en muestras de agua de río en dos provincias ecuatorianas. Se utilizaron cebadores específicos para los genes secY y lipL32 de especies patógenas de Leptospira. Adicionalmente se determinó la presencia de especies intermedia de Leptospira utilizando cebadores específicos para una secuencia del gen que codifica para el 16S rRNA. Los resultados mostraron la presencia de especies patógenas en un total de 8 muestras: 6 correspondientes a la provincia de Esmeraldas y 2 correspondientes a la provincia de Manabí. El secuenciamiento de los productos de PCR del gen lipL32 permitió identificar la especie de Leptospira presente en 8 de las 9 muestras. También se encontró la presencia de 13 muestras de agua positivas para especies intermedias, de las cuales 9 fueron también positivas para especies de Leptospira patógena. Los resultados de este proyecto proveen una herramienta importante para futuros estudios de monitoreo de Leptospira patógena en fuentes de agua.
Descripción : Leptospirosis is a zoonotic disease of worldwide distribution, and a considerable public health problem in Ecuador. This disease, caused by bacteria from the genus Leptospira, is commonly transmitted through water and soil contaminated with urine from infected mammals. For this reason, monitoring commonly usable water sources from risk areas is an important tool for understanding the development of leptospirosis outbreaks. This study presents a conventional PCR and real time PCR strategy for the detection of pathogenic species of Leptospira in water samples from two Ecuadorian provinces. For this purpose, Leptospira specific primers were used targeting the secY and lipL32 genes. Additionally, the presence of intermediate specieswas determined using primers that target a sequence of the 16S ribosomal gene. Our results show the presence of pathogenic species in 8 samples: 6 corresponding to the province of Esmeraldas and 2 corresponding to the Province of Manabí. The sequence analysis of these samples for the lipL32 PCR products allowed for the identification of the species present in 8 out of 9 samples. We also found the presence of 13 positive water samples for intermediate species, out of which 9 samples were also positive for pathogenic species of Leptospira. The results of this project provide with an important tool for future studies of pathogenic Leptospira monitoring in water sources.
URI : http://repositorio.usfq.edu.ec/handle/23000/2504
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