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Título : Structural property of soybean lunasin and development of a method to quantify lunasin in plasma using an optimized immunoassay protocol
Autor : Bustamante, Gabriela (dir)
Laso del Hierro, Francisco José
Descriptores / Subjects : Medicina
Fecha de Publicación : 2014
Ciudad: Editorial : Quito, 2014
Cita Sugerida : Tesis (Médico), Universidad San Francisco de Quito, Colegio de Ciencias de la Salud; Quito, Ecuador, 2014
Resumen / Abstract: Lunasin es un péptido quimiopreventivo de 43-amino ácidos que existe naturalmente con propiedades anticancerígenas y antiinflamatorias demostradas. Los objetivos de este estudio fueron determinar el efecto de la temperatura en la estructura secundaria de lunasin, desarrollar un método para aislar lunasin del plasma humano utilizando una columna microgiratoria de intercambio iónico y cuantificar la cantidad de lunasin utilizando ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas optimizado (ELISA por sus siglas en inglés). Lunasin fue purificada utilizando una combinacón de cromatografía por intercambio iónico, ultrafiltración y cromatografía por filtración en gel. Dicroismo circular demostró que el incremento de temperatura de 25 a 100 °C resultó en cambios en la estructura secundaria de lunasin y en su capacidad para interactuar con anticuerpos policlonales de conejo.ELISA demostró que anticuerpos policlonales de conejo para lunasin tienen una titulación de 250 y una actividad específica de 0.05 ml/μg.Se detectó una respuesta linear entre 16 a 48 ng de lunasin por mL (y = 0.03x – 0.38, R2 = 0.96). El uso de la columna microgiratoria de dietilaminoetil (DEAE) para aislar el plasma con lunasin agregada demostró que la mayor cantidad de lunasin (37.8-46.5%) se unió a la columna eluida con el amortiguador Tris-HCl, pH 7.5 con un rendimiento de hasta 76.6%. En conclusión, lunasin puede ser aislada del plasma humano con una técnica simple utilizando una columna microgiratoria de DEAE y puede ser cuantificada utilizando un procedimiento validado de inmunoensayo optimizado. Este método puede ser usado directamente para cuantificar lunasin en plasma en diferentes estudios humanos y animales apuntando a determinar su biodisponibilidad.
Descripción : Lunasin is a 43-amino acid naturally occurring chemopreventive peptide with demonstrated anti-cancer and anti-inflammatory properties. The objectives of this study were to determine the effect of temperature on the secondary structure of lunasin, to develop a method of isolating lunasin from human plasma using an ion-exchange microspin column and to quantify the amount of lunasin using an optimized enzyme-linked immunosorbent assay. Lunasin was purified using a combination of ion-exchange chromatography, ultrafiltration and gel filtration chromatography. Circular dichroism showed that increased in temperature from 25 to 100 °C resulted in changes on the secondary structure of lunasin and its capability to interact with rabbit polyclonal antibody. Enzyme linked immunosorbent assay showed that lunasin rabbit polyclonal antibody has a titer of 250 and a specific activity of 0.05 mL/μg. A linear response was detected between 16 to48 ng lunasin per mL (y = 0.03x 0.38, R2 = 0.96). The use of diethylaminoethyl microspin column to isolate spiked lunasin in human plasma showed that most lunasin (37.8–46.5%) bound to the column eluted with Tris–HCl buffer, pH 7.5 with a yield up to 76.6%. In conclusion, lunasin can be isolated from human plasma by a simple DEAE microspin column technique and can be quantified using a validated and optimized immunoassay procedure. This method can be used directly to quantify lunasin from plasma in different human and animal studies aiming to determine its bioavailability.
URI : http://repositorio.usfq.edu.ec/handle/23000/3039
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