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Título : Desarrollo de un ensayo basado en aptámeros para la detección de trombina en sangre
Autor : Méndez, Miguel Ángel (dir)
Montero Oleas, Andrea Cristina
Descriptores / Subjects : Biotecnología
Sangre
Proteínas
Preparación de Reactivos
Fecha de Publicación : dic-2015
Ciudad: Editorial : Quito: USFQ, 2015
Cita Sugerida : Tesis (Ingeniero en Procesos Biotecnológicos), Universidad San Francisco de Quito, Colegio de Ciencias Biológicas y Ambientales; Quito, Ecuador, 2015
Resumen / Abstract: La cuantificación y detección de proteínas son herramientas clave para el desarrollo de biociencias, principalmente en los campos relacionados al diagnóstico de enfermedades, proteómica y el desarrollo de kits de diagnóstico. Sin embargo, los métodos actuales de cuantificación de proteínas pueden presentar grandes desventajas cuando son realizados a gran escala, en donde el precio es una limitante. Como solución a estos problemas, en este trabajo proponemos el desarrollo de un ensayo basado en aptámeros para la detección de proteínas en sangre. Este ensayo consiste en la aplicación de un algoritmo computacional para el diseño de un complejo de aptámeros específico para el reconocimiento y detección de una proteína específica en la sangre, que en el caso de este estudio, es la trombina. El complejo aquí diseñado es una molécula formada por dos secuencias de ADN; el aptámero HD1, de unión específica a trombina y la secuencia c-Myc, la cual tiene una estructura G-cuádruplex paralelo que tiene la capacidad de trabajar como un fluoróforo en presencia del pigmento NMM IX. Posterior al diseño computacional, se usó este complejo para desarrollar un Dot Blot que en lugar de usar anticuerpos usa dicho complejo como sonda de reconocimiento. La fluorescencia resultante del pigmento enlazado al complejo de reconocimiento diseñado, es cuantificada a través del cálculo de la densidad integrada de cada spot, y esto ofrece una idea de la cantidad de trombina en la muestra. Este estudio representa los experimentos iniciales para la estandarización de un protocolo que funcionará para la cuantificación de proteínas en sangre, el cual a futuro puede convertirse en una herramienta clave para el diagnóstico de enfermedades.
Descripción : The detection and quantification of proteins is a key tool for the development of biosciences specially concerning to the diagnosis of diseases, research on proteomics and the development of diagnostic kits. However, current methods for quantifying proteins can exhibit great disadvantages when they are conducted on a large scale where price is a concern. To solve these problems, in this project we propose the development of a system based on aptamers for the detection of proteins in blood. This test consists in applying a computational algorithm for the design of an aptamer based complex for the specific detection and recognition of a protein in blood, which in the case of this study is for thrombin detection. The complex here designed is a molecule consisting of two DNA sequences; first an aptamer HD1, that specifically binds to thrombin, followed by the c-Myc sequence, which has a G-quadruplex parallel structure that has the ability on the presence of the dye NMM IX to work as a fluorescence reporter. After the computational design, this complex was used to develop a Dot Blot that instead of using antibodies use the complex designed as recognition probe. The resulting fluorescence of the pigment bonded to the designed recognition complex is quantified by calculating the integrated density of a digital photograph of each spot, and this gives an idea of the amount of thrombin in the sample. This study represents the initial phase to standardize a protocol that will work for the quantification of proteins in the blood, which in future can become a key tool for the diagnosis of diseases
URI : http://repositorio.usfq.edu.ec/handle/23000/5617
Aparece en las colecciones: Tesis - Ingeniería en Procesos Biotecnológicos

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