Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: http://repositorio.usfq.edu.ec/handle/23000/5618
Título : Metodología de micro dispositivo de análisis en papel para la detección y cuantificación de protrombina en sangre
Autor : Méndez, Miguel Ángel (dir)
Calahorrano Silva, Andrea Alejandra
Descriptores / Subjects : Sangre
Análisis
Pruebas Químicas
Investigaciones
Fecha de Publicación : dic-2015
Ciudad: Editorial : Quito: USFQ, 2015
Cita Sugerida : Tesis (Ingeniera en Procesos Biotecnológicos), Universidad San Francisco de Quito, Colegio de Ciencias Biológicas y Ambientales; Quito, Ecuador, 2015
Resumen / Abstract: Los métodos actuales para el diagnóstico de analitos en matrices complejas representan un alto grado de inversión económica y principalmente de tiempo. Existen técnicas que proporcionan información de alta confiabilidad que engloban una amplia gama de conocimientos con aplicación en muchas áreas, la microfluídica es una de ellas. El objetivo de esta técnica es desarrollar sistemas en los que se utilizan volúmenes pequeños. La caracterización de los micro dispositivos de análisis en papel son parte de un proyecto global que pretende el desarrollo de nuevas tecnologías de detección con fluorescencia de blancos biológicos usando aptámeros donde la microfluídica es una alternativa. El desarrollo de esta investigación fue divida en tres fases importantes. En la fase preliminar se usó el kit de Micro BCA Protein Assay Reagent obteniendo una reacción colorimétrica morada, mientras que en la primera fase de desarrollo se empleó el kit Liquicolor Glucose obteniendo una reacción colorimétrica naranja. Finalmente, en la segunda y última etapa un complejo de aptámero unido al pigmento, NMM IX, fue usado. La fluorescencia fue observada cuando el complejo fue exitado usando un transiluminador de luz azul con el dispositivo de microfluídica cargado con una muestra de plasma (con la ayuda de detección de protrombina, molécula diana de esta fase). En la segunda fase se aplicaron una serie de ensayos para el análisis de fluorescencia, métodos de lavado y concentraciones óptimas fueron testeados. Los resultados de estos ensayos fueron positivos. Cada una de las fases muestran resultados que en el futuro podrían ser replicados para cualquier tipo de analito con micro dispositivos de análisis en papel. En general cada kit empleado funciona con los micro dispositivos de análisis de papel. Para lograr la cuantificación de protrombina es necesario cambiar el diseño del chip para que el pigmento NMM IX, no se pegue a la fibra de celulosa y lograr como resultado una fluorescencia óptima.
Descripción : Current methods for analyte detection on complex matrices represent a high level of economic investment and time. There are many techniques that provide high reliable information that encompasses a wide range of fields with applications in many areas, microfluidics is one of these techniques. The objective of this method is to develop systems in which small volumes (microliter scale) are used. The characterization of the micro-paper based analytical devices methodology is part of a global project that pretends the development of new methodologies for the detection with fluorescence of biological targets using aptamers where microfluidics is one of the alternative setups. The development of this investigation was divided in three main stages. In the preliminary stage, the Micro BCA Protein Assay Reagent kit was use to obtain a Purple colorimetric reaction, while in the first stage the Liquicolor Glucose kit was use to obtain a orange colorimetric reaction. Finally, in the second and last stage a complex with an aptamer bound to the NMM IX dye was used. Fluorescence was observed when the complex was excited using a blue light transilluminator with the microfluidics device loaded with a plasma sample (with the aim of detecting prothrombin, target molecule of this phase). In the second stage a series of assays for the fluorescence analysis, washing methods and optimal concentration were tested. The overall results of these assays were positive. Each of the stages shows results that in the future could be replicated for any analyte with micro-paper based analytical devices. In general every kit evaluated works fine with the paper-based analytical devices. To achieve the quantification of the prothrombin a change of the design of the chip will be necessary in order that the NMM IX dye does not stick to the cellulose fiber and resulting on an optimal fluorescence.
URI : http://repositorio.usfq.edu.ec/handle/23000/5618
Aparece en las colecciones: Tesis - Ingeniería en Procesos Biotecnológicos

Archivos en este ítem:
Archivo Descripción Tamaño Formato  
122835.pdfTESIS A TEXTO COMPLETO1,9 MBAdobe PDFThumbnail
Visualizar/Abrir


Este ítem está sujeto a una licencia Creative Commons Licencia Creative Commons Creative Commons