Structural property of soybean lunasin and development of a method to quantify lunasin in plasma using an optimized immunoassay protocol

Abstract

Lunasin es un péptido quimiopreventivo de 43-amino ácidos que existe naturalmente con propiedades anticancerígenas y antiinflamatorias demostradas. Los objetivos de este estudio fueron determinar el efecto de la temperatura en la estructura secundaria de lunasin, desarrollar un método para aislar lunasin del plasma humano utilizando una columna microgiratoria de intercambio iónico y cuantificar la cantidad de lunasin utilizando ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas optimizado (ELISA por sus siglas en inglés). Lunasin fue purificada utilizando una combinacón de cromatografía por intercambio iónico, ultrafiltración y cromatografía por filtración en gel. Dicroismo circular demostró que el incremento de temperatura de 25 a 100 °C resultó en cambios en la estructura secundaria de lunasin y en su capacidad para interactuar con anticuerpos policlonales de conejo.ELISA demostró que anticuerpos policlonales de conejo para lunasin tienen una titulación de 250 y una actividad específica de 0.05 ml/μg.Se detectó una respuesta linear entre 16 a 48 ng de lunasin por mL (y = 0.03x – 0.38, R2 = 0.96). El uso de la columna microgiratoria de dietilaminoetil (DEAE) para aislar el plasma con lunasin agregada demostró que la mayor cantidad de lunasin (37.8-46.5%) se unió a la columna eluida con el amortiguador Tris-HCl, pH 7.5 con un rendimiento de hasta 76.6%. En conclusión, lunasin puede ser aislada del plasma humano con una técnica simple utilizando una columna microgiratoria de DEAE y puede ser cuantificada utilizando un procedimiento validado de inmunoensayo optimizado. Este método puede ser usado directamente para cuantificar lunasin en plasma en diferentes estudios humanos y animales apuntando a determinar su biodisponibilidad.